Диагностика хламидиоза.
Изучение хламидий на культуре клеток McCoy

Одним из лучших, но в то же время наиболее трудоемким является метод диагностики хламидий путем изоляции возбудителя на культуре клеток, обработанных различными антиметаболитами (“золотой стандарт”). Для этой цели обычно используют чувствительную культуру клеток, обработанную циклогексимидом. Чувствительность культурального метода по сравнению с ПЦР составляет 70-80%, но в то же время он превосходит молекулярно-биологические методы диагностики по специфичности. В литературе описаны случаи выявления хламидии трахоматис методом ПЦР при отрицательных результатах культурального теста и наоборот.

Показания:

• Беременность с отягощенным акушерским анамнезом.
• Оценка эффективности проведенного антибактериального лечения.
• Выявление чувствительности и резистентности к антибактериальным препаратам.
• Выявление хламидий у ВИЧ-инфицированных или лиц со вторичными иммунодефицитными состояниями (онкологические больные после проведенных курсов лучевой и химиотерапии, трансплантации костного мозга; лица, получающие иммунодепрессанты; больные вирусным гепатитом и туберкулезом).
• Бесплодие неясного генеза.
• Установление этиологии хронического инфекционного процесса урогенитального тракта.

Культуральный посев является референс-методом при оценке эффективности антибактериального лечения. При исследовании биопроб методом ПЦР после курса химиотерапии в некоторых случаях можно получить “ложноположительные с клинической точки зрения” результаты. Это связано с тем, что невозможно однозначно оценить жизнеспособность и патогенность микробной клетки на основании выявления фрагмента ее генома, используя только данные молекулярно-биологических методов . В этом случае при исследовании клинического материала с помощью культурального посева микробные клетки, потерявшие эти важные с клинической точки зрения свойства, не дадут роста в клеточной культуре.

Методика:

Для транспортировки и хранения клинического материала используют специальную питательную среду (транспортная среда). Она разливается в пенициллиновые флаконы по 1 мл и хранится при температуре + 4 ⁰ C (в общей камере бытового холодильника) в течение 2-х месяцев. Состав транспортной среды: среда МЕМ с добавлением 10% сыворотки крупного рогатого скота и антибиотика гентамицина концентрации 50 мкг/мл .

Клинический материал после перенесения в транспортную среду хранится в общей камере холодильника при температуре + 4 ⁰ С и, в течение двух суток должен быть доставлен в лабораторию.

Процедура посева

1. Обработка однодневной клеточной культуры McCoy 1% раствором ДЕАЕ декстраном в течение 30 минут.
2. Заражение обработанных клеток материалом, полученным от больных.
3. Центрифугирование зараженных клеток при 2500 g в течение 45 минут.
4. Отмывка клеток питательной средой.
5. Добавление к клеткам ростовой среды, cодержащей циклогексимид.
6. Инкубирование клеток в течение двух суток при +36 ⁰ C.
7. Обнаружение хламидий в клетках методом прямой иммунофлюоресценции или ПЦР.

Реальный срок получения результатов этим методом — семь дней.

Определение чувствительности:

В настоящее время в литературе растет число сообщений о случаях резистентности хламидий к антибактериальным препаратам (эритромицину, тетрациклину, доксициклину, фторхинолонам). Ценность культурального метода состоит в том, что он является пока единственным методом, позволяющим выбрать антибактериальный препарат для лечения хламидийной инфекции и оценить эффективность антибактериальной терапии.

Схема метода выявления устойчивости Chlamydia trachomatis к антибактериальным препаратам

• Хламидийным изолятом, выделенным от больного при посеве заражают чувствительные клетки.
• К зараженным клеткам добавляют ростовую среду, содержащую антибиотик.
• Зараженные клетки инкубируют 5 дней при температуре + 36 ⁰C.

Чувствительность хламидий к антибиотику определяется по подавлению инфекции в зараженных клетках. Процедура длительная, занимает по времени две недели.

Оглавление

Назад

Вверх

Вперед